Типирование эритроцитов крови по антигенам системы Резус является вторым по важности иммуногематологическим исследованием после определения крови по AB0 системе. Правильное определение резус-антигенов эритроцитов позволяет проводить профилактику посттрансфузионных осложнений и резус конфликтов (возникающих в тех случаях, когда резус-отрицательные женщины планируют детей от резус-положительных отцов).
Определение резус-фактора цоликлонами https://sangvitest.ru/opredelenie-rezus-faktora-coliklonami/ состоит из следующих шагов:
- вначале производится определение сильных форм антигена D с помощью реагента ЭРИТРОТЕСТ-ЦОЛИКЛОН Анти-D Cупер (раствор в флаконах черного цвета). Для определения реагент смешивается с небольшим количеством исследуемой крови на плоскости или в пробирке. В случае наблюдения четкой ярко-выраженной реакции гемагглютинации (слипания эритроцитов в хорошо различимые глазом хлопья или глобулы), кровь типируется как резус-положительная (Rh+);
- при отсутствии у исследуемой крови реакции агглютинации с эритроцитарным диагностикумом Анти-D Cупер следует выполнить тест на слабые формы антигена D, используя неполные антитела класса IgG. В отличие от антител класса IgM неполные антитела не способны давать прямую реакцию агглютинации с антигенами эритроцитов, поэтому тест проводится методом коагглютинации. При этом используется высокомолекулярное вещество: усилитель агглютинации (например, желатин или полиглюкин). Смесь исследуемых эритроцитов, реагента ЭРИТРОТЕСТ-ЦОЛИКЛОН Анти-D и усилителя агглютинации подвергается инкубации в течение 10 минут при повышенной температуре (47 градусов Цельсия). Если происходит образования хорошо различимых хлопьев, сгустков или глобул, то кровь является резус-положительной (Rh+). Если реакции коагглютинации не произошло, то кровь типируется как резус-отрицательная (Rh-). Проведение отрицательного контроля: инкубирование исследуемых эритроцитов с усилителем агглютинации без добавления раствора антител — при выполнении данного исследования является обязательным;
- при получении в исследовании с неполными антителами неоднозначного результата (мелкозернистой или неполной агглютинации) следует выполнить так называемую непрямую пробу Кумбса (или непрямой антиглобулиновый тест). Отмытые эритроциты исследуемой крови сначала подвергаются инкубации с раствором неполных антител (реагентом ЭРИТРОТЕСТ-ЦОЛИКЛОН Анти-D) в течение 30 минут при температуре 37 градусов Цельсия. После промывки физраствором и центрифугирования к эритроцитам добавляется антиглобулиновая сыворотка и производится осторожное перемешивание. Если наблюдается агглютинация, то кровь имеет положительный резус-фактор, если агглютинация отсутствует, то резус-фактор крови отрицательный.
Для цельной донорской крови и любых эритроцитарных компонентов необходимо производить определение слабых форм эритроцитарного антигена D. Также посредством цоликлонов Анти-C, Анти-E и Анти-CE рекомендуется производить определение фенотипов dCe или dcE у доноров с резус-отрицательной кровью.